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高通量微升级液滴培养组学系统的核心操作
更新时间:2025-07-31      阅读:819
高通量微升级液滴培养组学系统是基于液演微流控技术开发的微型化高通量单细胞培养及分选装备,可以实现对环境菌群在单细胞水平上进行分离培养,并分选保存至多孔板中,形成双重备份。单次运行实现可以处理约5000个液滴(500个单克隆),液滴生成后存储于高透气性管路中进行孵育(0-3天),最后通过光学信号(OD、荧光、化学发光等)进行检测分选,分选后的液滴进入多孔板中并且可以形成双重备份。
核心操作流程:
步骤1:液滴生成
将样品与培养液分别注入芯片进样口,启动液滴生成模块;
控制液滴体积为1-4μL‌,通量5000-10000个/小时‌,显微镜初步确认单细胞包裹率‌。
步骤2:液滴培养
液滴转移至高透气性聚合物管路(如氟化乙烯丙烯共聚物管路);
设置培养参数:
温度:根据微生物需求(通常25-37℃);
时间:‌0-60天‌(常规培养3-8天)‌;
氧分压:需厌氧环境时启用控氧模块(维持氧气≤0.04%)‌。
步骤3:实时光学检测
开启多波段光学检测(OD600/荧光/化学发光),以‌1800-2500个/小时‌速率扫描液滴;
设定阈值:如OD>0.2判定为生长阳性液滴‌。
步骤4:目标液滴分选
激活分选模块,将目标液滴(如高荧光信号)精准喷射至96/384孔板;
分选通量‌1800-2500个/小时‌,自动记录位置并生成双重备份‌。
步骤5:液滴回收与验证
分选后孔板移出,穿刺液滴释放细胞;
涂布平板或PCR验证单克隆纯度‌。
 
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